卡梅德生物科技（天津）有限公司
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郵箱：info@kmdbioscience.com
卡梅德生物（KMD Bioscience）多年致力于重組蛋白表達與制備研究。我們的科學家擁有豐富的蛋白昆蟲細胞蛋白表達、發酵和純化經驗，能夠快速為不同客戶制定定制化的蛋白昆蟲細胞表達策略。
昆蟲細胞表達重組蛋白涉及兩代病毒的制備工作，簡稱為P1和P2代。P1代病毒主要是用于蛋白表達預實驗以及擴增P2代病毒，P2代病毒用于大規模蛋白表達制備服務。昆蟲細胞蛋白表達系統適合于膜蛋白的重組表達，4次及以下跨膜蛋白幾乎可以有效地在昆蟲細胞中進行表達和純化。膜蛋白的純化是一件比較耗時耗力的事情，卡梅德生物科技可以提供純度高達95%的全長膜蛋白定制產品，更多詳情請參考蛋白純化章節。
昆蟲桿狀病毒表達系統屬于真核表達系統之一，具有外源基因表達水平高、易于表達異源多聚體蛋白、安全性高等特點，重組表達的蛋白產品具有正確的翻譯后修飾和生物學活性，如二硫鍵的形成、磷酸化、糖基化等等。相對于哺乳動物細胞蛋白表達系統，蛋白昆蟲表達體系所生產的蛋白，糖基化程度偏低。但是昆蟲蛋白表達系統的優勢在于，利用病毒進行轉染，操作相對容易，轉染體系容易形成（相對哺乳動物瞬時轉染體系）。
卡梅德生物（KMD Bioscience）可以為客戶提供整套的蛋白表達方案，我們免費對客戶提供的基因進行序列分析測；同時根據Sf9，Sf21，Hi-5及S2昆蟲細胞的密碼子偏愛性，免費為您進行密碼子優化，從而有效提高重組蛋白表達量。我們的優勢還體現在，我們的團隊成員具有多年的重組蛋白和抗體的制備經驗，我們熟悉不同蛋白的表達特性，如膜蛋白表達，內源性蛋白表達以及分泌性蛋白表達，同時我們GMP/GLP 生產級實驗室和嚴謹的符合臨床注冊原則的文件記錄體系，能為您的蛋白產品保駕護航。
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蛋白表達昆蟲宿主細胞系：
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細胞 |
來源 |
用途 |
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Sf9 |
* 分離自IPLBSF21-AE |
* 適于轉染、純化、生產高滴度病毒、鋪板以及表達重組蛋白 |
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Sf21 |
* 衍生于IPLBSF-21細胞系 |
* 轉染、純化、生產高滴度病毒、鋪板以及表達重組蛋白。Sf21細胞在一些結構表達方面優于Sf9細胞，如晶體蛋白 |
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Hi5 |
* 源于白菜尺蠖卵巢細胞，粉紋夜蛾細胞 |
* 適用于重組病毒顆粒表達，也常用于轉染和空斑純化，且Hi5細胞系更適合來表達分泌型重組蛋白 |
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S2 |
* 來源于果蠅晚期胚胎細胞。其中多為雌性四倍體細胞，也有雙倍體細胞 |
* 比較適合病毒結構蛋白等重組表達 |
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服務步驟：
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步驟 |
服務內容 |
周期 |
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亞克隆 |
* 客戶不提供基因模板: 密碼子優化，基因合成
* 客戶提供質粒：擴增并抽提含有目標基因的載體質粒
* 拼接序列驗證：測序
* 交付：正確構建的重組表達質粒及測序原始報告 |
2周 |
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P1代病毒制備與表達小試 |
* 重組Bacmid DNA擴大化培養，并轉染昆蟲細胞制備P1和P2病毒
* P1代病毒滴度測定（滴度106－108），并驗證小量蛋白表達
* 交付：實驗報告與圖片 |
3–4周 |
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表達優化及測試 |
* P2病毒擴增，病毒滴度測定（滴度107－109）
* P2代病毒轉染昆蟲細胞，蛋白表達純化
* SDS-PAGE及WB分析 * 交付：圖片，實驗報告，純化好的蛋白產品 |
3-4周 |
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大規模重組蛋白表達及純化 |
* 1L (默認)，5L，10L，30L，80L，130L和250L任選 * 通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白
* SDS-PAGE和WB驗證蛋白表達 |
協商 |
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服務優勢：
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--密碼子優化：包含稀有密碼子分析，蛋白親水性分析和跨膜結構域的預測分析
--多種融合標簽載體和宿主，以保證高可溶蛋白表達和高蛋白活性
--多種規模蛋白發酵模式：小規模（500ml，2.5L，10L和30L）、大規模（80L，130L和250 L發酵罐）
--短時間內制備高純度毫克級，克級重組蛋白
--低內毒素：LAL檢測法<0.1EU/ug
--完整的GMP文件支撐體系，保證您的產品所有材料、試劑和制備信息可追溯
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如何訂購？
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