卡梅德生物科技（天津）有限公司
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卡梅德生物（KMD?Bioscience）多年來致力于重組蛋白表達與制備研究。重組蛋白表達純化產物的分析過程，需要對蛋白的N端序列進行確認。N端區域是蛋白質及多肽重要的結構和功能部位，通過N端的少數幾個氨基酸殘基就可以對大多數蛋白質進行鑒定。我們擁有經驗豐富的技術人員，優質的測序儀器，應用現有的質譜技術平臺，可以提供高質量的蛋白質N端測序服務，通過Edman降解法能夠準確的測定蛋白質N端多達67個氨基酸序列。
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Edman法測定單個氨基酸循環包括3步：第一步是在堿性條件下，PITC與蛋白N端的游離氨基結合；第二步是在酸性溶液中，N端殘基被切除；第三步是PITC結合的殘基轉化成為更為穩定的PTH殘基，經過在線的HPLC分析，根據洗脫時間來確定氨基酸種類。
測序步驟：蛋白樣品一般先進行SDS-PAGE的分離，保證樣品的純度滿足測序的要求；隨后將SDS-PAGE上的蛋白樣品轉移到PVDF膜上；經過染色確定把蛋白條帶并切出；Edman測序儀對得到的PVDF膜上的蛋白樣品進行分析。測序原理如圖1所示：
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圖1 Edman降解法測序原理
Edman測序（N端測序）機器型號：PPSQ-31A
圖2 PPSQ-31A 蛋白質N端測序儀器
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樣品要求：
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客戶提供 |
要求 |
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PVDF轉膜樣品 |
* 具體轉膜條件請參照附件，請使用PVDF膜，不要用硝酸纖維素膜（NC膜），考馬斯亮藍R250或麗春紅染色 |
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蛋白凍干粉 |
* 純度大于95%則不需要轉膜，樣品緩沖液需要不含鹽，提供20-60ug |
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天然純化多肽樣品 |
* HPLC純度>95%，提供約100ug |
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項目服務特征：
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--蛋白表達及pulldown產物的鑒定：重組蛋白氨基酸順序驗證以及各種免疫沉淀蛋白產物的驗證
--細胞株表達產物的驗證：驗證細胞株建立和發酵過程中蛋白產物N端甲硫氨酸和信號肽是否正確處理
--超長氨基酸檢測：蛋白質N端長達67個氨基酸測序
--抗體藥物N端序列驗證
--天然提取，分離純化的小分子多肽序列鑒定
--實驗周期快：2-3周
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實驗案例：
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某種天然純化小分子多肽樣品：蛋白經過凍干處理后復溶調整蛋白濃度至1ug/ul；上樣體積50ul
柱信息： C18，流速是0.6ml/min
圖3 HPLC分離圖譜
圖4：N端第1位氨基酸圖譜
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圖5：N端第2位氨基酸圖譜
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圖6：N端第3位氨基酸圖譜
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圖7：N端第4位氨基酸圖譜
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圖8：N端第5位氨基酸圖譜
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如何訂購？
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