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          磷酸化位點鑒定服務

          卡梅德生物長期以來一直專注于優化我們的質譜技術平臺。我們開發了一條完整的蛋白質鑒定流程,從樣品制備、蛋白質分離純化、質量分析,最后到系統的生物信息學分析。

          磷酸化是細胞信號通路中重要的共價翻譯后修飾 (PTM)。這種修飾是一個可逆過程,由蛋白激酶催化。研究表明,超過 30% 的真核蛋白質會發生磷酸化。磷酸化修飾對靶蛋白主要有兩種調控機制:(1)磷酸化可能引起修飾蛋白結構的構象變化,如酶和受體,開啟或關閉功能。(2) 磷酸化改變了蛋白質對其效應子的親和力,通過這樣做,磷酸化的蛋白質可以招募或釋放其下游效應子。因此,可以想象磷酸化修飾調節了廣泛的生物活動,如細胞生長、細胞代謝、細胞分裂等。

          真核生物中的絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸和組氨酸殘基可能發生磷酸化。在這四種磷酸化中,酪氨酸磷酸化較為罕見,但非常關鍵。酪氨酸激酶受體位于 MAPK 通路的最上游,調節 Ras 和其他激酶,啟動磷酸化級聯反應。

          卡梅德生物建立了一個高靈敏度的 HPLC-MS/MS 管道,可以分析真核和原核生物中的多種磷酸化。

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          服務流程

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          圖1 蛋白磷酸化位點鑒定流程

          磷酸化位點的鑒定包括富集磷酸化肽,然后進行質譜分析。富集磷酸化肽段,這一步很關鍵,因為磷酸化蛋白質占總蛋白數量的1%-2%。在每次實驗操作中,由已知的磷酸化位點的肽組成陽性對照,進行與測試樣品相同的實驗操作。通過顯示磷酸鹽損失的MS/MS的峰圖,來鑒定磷酸化位點。

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