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      人源scFV抗體庫構建服務

      卡梅德生物(KMD?Bioscience)多年來致力于抗體領域研究。我們積累了豐富的抗體文庫構建經驗,能夠為客戶提供基于抗體噬菌體展示文庫技術的single-chain Fv(scFv)抗體文庫構建服務。單鏈抗體(scFv)具有分子量小,組織穿透力強,易于進行基因工程改造等優點??返律锢每贵w噬菌體展示文庫技術,可以制備得到高親和力,結構穩定的scFv抗體。

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      人源scFV抗體庫構建:

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      噬菌體展示抗體文庫被廣泛應用于高親和力抗體的篩選工作,如血管生成標志物纖連蛋白,腫瘤特異性B3/B4抗原,EGFR等蛋白特異性高親和力抗體的篩選。通過噬菌體展示技術構建的抗體文庫通常來源于RT-PCR擴增外周血單核細胞,脾細胞,骨髓細胞和扁桃體來源的mRNAs形成cDNA片段,將這些基因片段拼接到噬粒載體,再轉入噬菌體形成共價結構蛋白表達和體外展示??贵w重鏈和輕鏈獨立自由表達,然后隨機地組合,形成噬菌體克隆數達到1011-1012的龐大抗體庫。

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      圖1 噬菌體展示技術

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      Single-chain Fv(scFv)抗體文庫是指將抗體的可變區(VH和VL)基因,尤其是CDR區域(互補決定區)采用不同的策略和方式,如氨基酸突變,移碼讀框等形成數目龐大的不同克隆,并從這些克隆中篩選出針對目的抗原的高親和力單鏈Fv抗體。研究表明,抗體可變區的CDR3的多樣性直接決定了抗原特異性和結合親和力,并且CDR3-FR(frame region)組合的多樣性決定了抗體經歷何種方式的親和成熟過程。

      我們采用錯誤傾向性PCR,巢式PCR等技術構建達到108-109CFU庫容量的一級文庫。相比Fab?抗體文庫,由于scFv抗體分子量更小,約25kDa,scFV抗體更加穩定,也不容易形成多聚體。

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      噬菌體宿主體系:

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      卡梅德生物科技噬菌體展示平臺擁有M13,T4和T7噬菌體系列,根據客戶的項目需求(展示的蛋白或抗體片段的大小等參數),我們會采用不同的噬菌體系列進行文庫構建。在我們完成的案例中,基于M13噬菌體pIII基因展示體系較為常用,構建的庫容量可以達到1011,其中有效庫容量為109。

      同時,客戶也可以提供抗原,我們進行體外外周血淋巴單核細胞敏化,從而獲得更高親和力和特異性的單克隆抗體,通?;谠摲椒ㄖ苽涞目贵w親和力能達到10-13?M級別。

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      項目流程:

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      步驟

      服務內容

      周期

      抗體cDNA制備

      * ?總RNA提取

      * ?高保真RT-PCR制備cDNA

      * 系統對照:Actin特異引物PCR擴增,以鑒定逆轉錄產品cDNA質量

      8-9周

      構建抗體庫

      * 引物設計與合成:抗體可變區兼并引物設計、合成

      * 以cDNA為模板,PCR擴增抗體重鏈和輕鏈可變區基因

      * scFv基因拼接

      * 噬粒構建與轉化:酶切、連接scFv和噬菌粒載體,電擊轉化TG1宿主菌,構建抗體庫

      * 鑒定:隨機挑選20-50個克隆,PCR鑒定陽性率,測序和分析抗體序列

      * 包裝,>1x1013噬菌體顆粒/ml

      交付

      * 構建報告,包括詳細建程序,代表性序列信息

      * 產品交付:細菌和噬菌體兩種形式抗體庫

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      服務優勢:

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      --免疫,天然和合成抗體噬菌體文庫構建

      --周期短:預制抗體文庫篩選服務

      --嚴謹完整的QC標準

      --高庫容量:獨立克隆數107-1012

      --高通量篩選與靈活,個性化的文庫淘篩策略

      --高親和力抗體制備:10-7-10-13

      --多種噬菌體展示系統:M13,T4,T7

      --完整的上下游服務:提供從抗體制備、抗體測序,抗體標記修飾,到抗體人源化等一站式技術服務,節約客戶寶貴時間和經費

      --服務可定制:根據客戶需求制備,為每一個客戶量身定制實驗方案,滿足每一位客戶的特殊需求

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      技術流程:

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      如何訂購?

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      福利电影

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