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          適體體外篩選服務

          卡梅德生物(KMD?Bioscience)提供的適體體外篩選服務可以為客戶快速、準確的篩選出具有高親和力、高特異性的適配體,為客戶的實驗項目節省成本。我們通過指數富集 (SELEX) 方法靈活利用配體系統的自然進化(比如:SELEX法可以識別不同的細胞或檢測兩類細胞的分子水平差異),提供一站式體外適配體篩選服務。

          適體是短的 20–80 nt 單鏈 DNA 或 RNA 序列或蛋白質,因其3維結構具有親和力高、特異性高的特點,所以用來結合目標分子。因為RNA序列可以在實驗室中通過體外轉錄合成,所以RNA 序列構成了核酸適體的大部分。并且帶有 2'-OH,可能會比單鏈 DNA 分子提供更多樣化的二級結構。

          適體是單鏈核酸(DNA 或 RNA),可以以高親和力和特異性結合預定的靶標。它們可被定義為“人工抗體”,已廣泛應用于生命科學基礎研究、臨床診斷和藥物開發等領域??返律锝M織了一批在適體體外篩選服務方面積累了豐富經驗的優秀專家。

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          指數富集法(SELEX):

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          卡梅德生物的科學家利用SELEX法,為客戶提供適體體外篩選服務,為客戶提供有效、準確的技術咨詢如:蛋白質的適體篩選(細胞的適體篩選等)需客戶提供靶標蛋白或相關序列或序列號,卡梅德生物將對靶標蛋白進行SDS-PAGE檢測,之后進行蛋白文庫的制作與靶蛋白篩選,然后解離篩選的適配體,重復洗脫篩選,經PCR,NGS測序,最后合成適配體??返律镆矠榭蛻籼峁┮徽臼椒?,從基因分析合成---蛋白表達純化---適體體外篩選,為客戶的實驗提供有力的支撐。

          SELEX 是一種體外方法,廣泛用于從隨機單鏈核酸序列文庫中選擇與目標配體特異性結合的單鏈 DNA 或 RNA(也稱為適體)的寡核苷酸。SELEX技術的基本流程主要包括:1)體外化學合成單鏈寡核苷酸文庫;2) 將隨機化文庫與目標配體混合以允許寡核苷酸-目標結合;3) 洗去未與目標配體結合的核酸分子;4) 洗脫結合的適體;5) 通過 PCR 方法擴增結合的適體以生成二級文庫用于下一輪篩選;6)重復步驟(2)-(5),獲得與目標配體具有高親和力和高特異性的適配體??返律锾峁┑倪m體體外篩選技術,在對蛋白質(細胞,小分子多肽)的適體篩選的實驗中,能快速篩選出候選靶分子。

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          圖1 SELEX方法的典型程序

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          服務范圍:

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          卡梅德生物提供的服務包括:

          --用于適體開發的基于蛋白質的 SELEX 服務

          --用于適體開發的基于全細胞的 SELEX 服務

          --用于適體開發的基于活體動物的 SELEX 服務

          --用于適配子開發的適配子對開發服務

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          服務內容:

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          服務項目

          內容

          周期

          單鏈DNA文庫制作

          * 化學合成一個定制的寡核苷酸文庫,由隨機生成的固定長度序列組成,兩側是恒定的 5' 和 3' 末端作為引物

          1周

          體外選擇

          * 靶標孵育、結合序列洗脫和擴增;重復以上步驟3~4次

          4-5周

          NGS測序

          * 利用NGS測序、生物信息學和生物物理方法獲取候選人的基本信息

          2周

          適體合成

          * 通過 HPLC 進行高質量適體合成和純化,并提供 MS 報告

          1周

          修改

          * 不同的需求和應用選擇了不同的改性方法,如生物素、5'-NH?2、5'-硫醇、熒光染料……

          2周

          結合親和力測試

          * BLI、SPR等技術,用于KD測定

          1周

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          客戶提供:

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          樣品

          樣品要求

          蛋白

          * 不含大標簽;緩沖液無游離氨基;PBS緩沖液,不含Tris;純度>95%

          * 蛋白0.5-1mg,濃度1mg/ml

          小分子物質

          * 水溶性好>1mM

          * 穩定:不易氧化,不易分解等

          * 稀釋熱不易過高

          * 純度>95%

          * 樣品量不少于10mg

          細胞與細菌

          聯系我們進行咨詢

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          交付內容:

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          --交付完整的實驗報告以及客戶指定的適配體序列

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          服務優勢:

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          --多年從事適配體開發的優秀科研人員

          --比常規適體具有更高的結合親和力

          --保證型交付周期促進項目成功

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          如何訂購?

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