卡梅德生物科技（天津）有限公司
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卡梅德生物（KMD?Bioscience）的細胞生物學科學家擁有超過10年從業經驗。我們在細胞支原體清除領域累積了多年經驗，對于細胞支原體的檢測我們提供多種方法，包括：微生物培養、DNA染色、酶的生化檢測、PCR檢測、Elisa檢測、RNA/DNA雜交、等溫擴增法。支原體污染的可怕之處在于，如果不進行具體測試，它就會被忽視，肉眼看不到支原體污染。此外，由于這些細菌的大小有限且倍增率相對較低，受污染的細胞培養物不會顯示出降低的 pH 值或明顯的濁度。然而，盡管經常使用抗生素，支原體污染仍可能存在并持續存在，并可能影響細胞。在受污染的細胞培養物中，這些細菌與目標細胞競爭營養。它們影響 DNA、RNA 和蛋白質合成的水平，改變基因表達并影響細胞膜、細胞器、細胞形態和抗原性。因此，它們可以抑制細胞生長、細胞代謝，并可能導致細胞死亡。因此，未發現的支原體污染從根本上質疑結果的相關性和有效性。
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圖1 支原體結構和細胞器
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支原體檢測方法：
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測試方法 |
測試原理 |
優勢 |
劣勢 |
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微生物培養 |
* 將可疑培養物的上清液轉移至特定培養基，隨后轉移至瓊脂；大約 2 周后，支原體污染導致出現“煎雞蛋”外觀的可見菌落 |
便宜、敏感、特異 |
耗時、復雜，只能對某些物種進行特異性識別、速度慢 |
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DNA染色 |
* 細胞培養物用非特異性熒光核酸染料（例如 DAPI）染色，支原體可以被識別為靠近真核細胞但與其細胞核有一定距離的較小點 |
便宜、快速、簡單 |
非特異性、低敏感性、主觀性、無物種鑒定 |
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酶的生化檢測 |
* 支原體產生酶，而這些酶在真核細胞中不存在；這些酶催化底物的周轉，導致熒光素酶活性/發光，可在酶標儀上讀取 |
快速、簡單、便宜、具體 |
無物種鑒定，結果可能因細胞系而異，需要多功能酶標儀 |
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通過 PCR 進行基因檢測 |
* 通過對編碼支原體 16S rRNA 的特定基因序列進行 PCR 擴增來分析支原體污染；可以使用針對 16S - 23S 基因間區域的特定引物鑒定不同的支原體物種；擴增的 DNA 通常用熒光染料進行定量，無論是在凝膠電泳分離后，在實時 PCR 擴增期間，還是通過在酶標儀上測量終點熒光強度 |
非常靈敏、特異、
快速、提供客觀的結果，有商業試劑盒 |
優化取決于經驗、檢測假陽性/假陰性的風險、需要無 RNAse 處理、需要熱循環儀 |
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用ELISA檢測表面抗原 |
* 針對支原體表面抗原的抗體用于捕獲亞基并主要通過在多功能酶標儀上讀取吸光度對其進行量化 |
簡單，便宜，適合HTS |
需要多功能酶標儀 |
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RNA/DNA 雜交 |
* 探針與支原體 RNA 或 DNA 雜交；它們可以與特定的物種、組或所有支原體兼容；信號被檢測為印跡上的雜交材料點或液體雜交的可檢測發射 |
具體、快速、便宜 |
取決于設備和經驗，需要無 RNAse 處理 |
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通過等溫擴增進行基因檢測 |
* 與 PCR 一樣，支原體 DNA 被擴增并檢測——然而，在等溫條件下并使用 4 - 6 個引物；由于較低且恒定的溫度就足夠了，因此該方法也可以在沒有熱循環儀的情況下進行 |
參見 PCR，無需熱循環儀，運行速度更快 |
需要無 RNAse 處理 |
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客戶提供：
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客戶可將需要進行支原體檢測或消除的細胞樣品提供給我們，我們需要100ul-10ml的細胞培養上清進行檢測（取決于檢測方法），或由我們進行細胞培養，而客戶僅需提供需要培養的細胞信息。
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服務優勢：
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--檢測時間短，細胞增殖檢測，細胞毒性檢測，細胞支原體檢測
--完善的實驗操作水平，完善的實驗條件，嚴格的細胞實驗控制體系，實驗人員具有多年細胞實驗成功經驗，保證您的實驗得以良好的完成
--提供詳細完整的實驗報告，包含實驗原始結果，每一項實驗參數，可直接用于論文的撰寫
--完備的儀器平臺：擁有多類型顯微鏡和流式細胞儀，酶聯免疫檢測儀等重要儀器，靈敏度高，線性范圍寬，重現性好
--提供從細胞培養、細胞染色到圖片拍照，數據分析等一站式技術服務
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如何訂購？
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